Tartalom
A folyékony tápanyagot a baktériumok, például az Escherichia coli tenyésztésére használják. A húsleves receptjei a baktériumfajtától és a genetikai módosítások, például az antibiotikum-rezisztencia jelenlététől függnek. A húslevest agar hozzáadásával megszilárdíthatjuk, amely lehetővé teszi a baktériumok számára, hogy különálló kolóniákat képezzenek, míg a folyékony tenyészetben egyszerűen diszpergálódnak az egész térfogatban. Ez alapvető, de nélkülözhetetlen technika a fejlett módszerekhez, például génklónozáshoz vagy mikrobiológiai vizsgálatokhoz. Ez a cikk feltételezi, hogy a szokásos laboratóriumi Escherichia coli törzseket Luria leves (LB) agarlemezeken (vagy Petri-csészékön) kell tenyészteni.
Mérjünk be 10 gramm baktériumminőségű triptont, 5 gramm élesztõkivonatot, 5 gramm nátrium-kloridot, 15 gramm agart vagy agarózt és 1 ml 1 N nátrium-hidroxidot. Keverjük össze ezeket egy mennyiségű desztillált és autoklávolt steril vízzel, amíg 1 liter közeget kapunk. Autoklávozza a közeget lazán lezárt palackokban vagy lombikokban 25 percig. Hagyja lehűlni kb. 50 ° C-ra, mielőtt hozzáadna olyan reagenseket, amelyeket nagy hőn elpusztítanak, például antibiotikumokat vagy más táplálékkiegészítőket.
Hagyja az autokláv közeget lehűlni 50 Celsius-fokos hőmérsékletre, és nem lehet alacsonyabb 45 Celsius-fokra, mivel az agar a tartályába áll, mielőtt önthetné. Készítsen steril Petri-csészéket, és öntsön annyit, hogy lefedi a lemez teljes felületét és annak mélységének legalább felét. Kerülje a tányérok túltöltését, és lehetőleg ne hagyja, hogy az agar érintkezzen az edény felső szélével. Hagyjuk a lemezeket megszilárdulni egy steril környezetben (például egy lamináris áramlású burkolat alatt) úgy, hogy a fedőket a fedél lejártáig és a burkolat sarkához hagyjuk.
Szárítsa meg a lemezeket. Bár a lemezeket azonnal felhasználhatjuk, amint azok fel vannak állítva, némi nedvesség jelenik meg az agar felületén, ez megakadályozza a baktériumtelepek megfelelő tapadását. Ezért a baktériumok felhordása előtt a legjobb a lemezeket szárítani, például úgy, hogy néhány napig vagy fél óráig szobahőmérsékleten ülnek, lamináris áramlású burkolat alatt vagy 37 ° C-os inkubátorban.
Tárolja a lemezeket. A szárított lemezeket fejjel lefelé (fordítottan) egymásra kell helyezni a fedélen, vissza kell helyezni az eredeti csomagolásukba, be kell ragasztani, és a fénytől való védelem érdekében fóliába kell csomagolni, vagy megfelelő tartályba. Mindig írja a tányérokra az elkészítés dátumát, és ne használja, ha a tányérok 2 hónaposak.