Tartalom
- A minták hígítása, galvanizálás és inkubálás
- Kézi számlálás
- Automatizált számlálás
- A számolás bonyolultabbá tétele
A mintában található mikrobák koncentrációjának meghatározásának egyik klasszikus módja a minta hígítása, a mikrobák tenyésztése és a kolóniák számlálása. A bevont mikrobák egy vagy több sejtből álló kolóniaképző egységből látható kolóniává nőnek, amely látható és megszámolható. A baktériumok a leggyakoribb mikrobák a tányérszám alkalmazásával. A telepek számát a talajban, a vízben és az élelmiszerekben található mikrobák kimutatására és számlálására használják. A kolóniák számlálására szolgáló protokollok hangsúlyozzák a pontos és módszertani megközelítést.
A minták hígítása, galvanizálás és inkubálás
Ha egy mikrobamintát egyszerűen kennek egy agarlemezre, akkor annyi kolóniát alkotó egységet fognak látni, hogy az egyes kolóniák összeolvadnak, és így lehetetlen számolni őket. A probléma megoldásához keverje össze a mintát egy folyékony közegbe, vegyen be kis mennyiségű keveréket és hígítsa tovább. Ismételje meg ezt a folyamatot 6-10 alkalommal. A végső hígítást terítsük el egy agarlemezre, és inkubáljuk négy-hét napig, mielőtt megszámolnák a telepeket.
Kézi számlálás
A kolóniák számolásának elsődleges trükkje az egyes kolónia pontok egyszeri megszámlálása. Az egyik megközelítés az, hogy a Petri-csészét rácsos háttérre helyezzük, és megszámoljuk a kolóniákat minden rácscellában, módszertani mintázatban mozogva az összes cellán. A megszámlált telepek megjelölése a Petri-csészék hátoldalán szintén hasznos módszer lehet. Általában legalább három lemezt meg kell számolnia; kizárólag 30–300 kolóniát tartalmazó lemezeket használjon robosztus következtetések levonására - javasolja a Microbiology Network, a cég, amely tanácsadási szolgáltatásokat nyújt a laboratóriumoknak és a gyártóknak. Azoknak a telepeknek a száma, amelyek túlságosan sok ahhoz, hogy számolni lehessen, vagy túl kevés telepekkel, az új hígításból át kell ültetni.
Automatizált számlálás
Az emberi hiba növeli azt a időt, amely a kolóniák manuális számlálásához kapcsolódik. A pontosság és a hatékonyság javítása érdekében helyezze a Petri-csészét automatizált kolóniaszámláló eszközbe. Az automata kolóniaszámlálók képeket készítenek az edényről, elválasztják a kolóniákat a háttérből, majd algoritmussal számolják a telepeket a lemezen. Az algoritmusok nehezen tudják megkülönböztetni a kolóniákat, amikor két vagy több kolónia érintkezik a szélekkel, tehát ez a folyamatban lévő szoftverfejlesztés területe.
A számolás bonyolultabbá tétele
A mikrobák sűrűségének a kolóniaszámból történő kiszámításának pontossága van bizonyos korlátozásokkal. A kolóniát alkotó egységek lehetnek egyetlen sejt, sejtlánc vagy egy sejtcsopor. Feltételezzük, hogy egy kolónia egy sejtet képvisel, tehát a telepek számából kiszámított koncentrációk alacsonyak lehetnek. A különböző mikrobáknak eltérő növekedési körülményekre van szükségük, és a tányéron lévő kolóniák csak azokat a mikrobákat képviselik, amelyek az adott inkubációs körülmények között az adott növekedési táptalajon virágzanak. Ezenkívül a kolóniaszámlálás nem regisztrálja az elhalt sejteket, ez egy fontos szempont, amikor szükség van a sejtek koncentrációjára az eredeti mintában.