Az enzim olyan fehérje, amely kémiai reakciókat katalizál (növeli a sebességet). A legtöbb enzim optimális hőmérséklete, vagy az a hőmérséklet, amelyen az enzimek a legjobban megkönnyítik a reakciókat, 35 és 40 Celsius fok között vannak. A hőmérséklet növekedése ezen az ablakon belül megnöveli a reakció sebességét, mivel felébreszti a molekulákat, és növeli az enzimek / reagensek összeütközésének és reakciójának a sebét. A túl magas hőmérséklet-emelés azonban denaturálhatja az enzimet, és megakadályozhatja annak működését.
Határozzuk meg az optimális enzimhőmérsékletet úgy, hogy a reakciót végtelen mennyiségben hevítjük, és kis mintákat veszünk a reakcióból, hogy meghatározzuk, mikor fordul elő a termék maximális előállítási sebessége.
Válasszon egy módszert. Határozza meg, hogyan fogja mérni a termék koncentrációját a kísérlet különböző pontjain. Például számos termék koncentrációját mérheti spektrofotométerrel, és kiszámíthatja a koncentrációt az abszorbancia alapján, vagy fluoreszcencia mérésével és a koncentráció kiszámításával a fluoreszcencia alapján.
Állítsa be a kísérletet. Helyezze a reagenseket és az enzimet egy fedéllel ellátott kicsi tartályba, például egy szcintillációs fiolába. A reakció megkezdődik. Helyezze a szcintillációs fiolát egy nagyobb, főzőpohárba, szobahőmérsékletű vízbe. Helyezze a főzőpoharat egy fűtőlapra. Helyezzen egy hőmérőt a főzőpohárba. Ez lehetővé teszi a reakció hőmérsékletének mérését különböző pontokon.
Vegyünk 100 mikroliter mintát a reakcióból szobahőmérsékleten, kb. 25 Celsius fokon. Kapcsolja be a fűtőlapot. Különböző hőmérsékleteken 30 és 40 Celsius fok (30,5, 31, 31,5 stb.) Között vegyünk 100 mikroliter mintát a reakciójából.
Határozza meg a termék koncentrációját minden hőmérsékleten. Amikor a hőmérséklet 40 Celsius fok fölé emelkedik, csökkenni fog a szubsztrátum termékké történő átalakulásának sebessége, mert az enzim denaturálódik. A termék maximális előállítási pontja az a pont, amikor a hőmérséklet az optimális.