Tartalom
A nagyteljesítményű folyadékkromatográfia egy módszer a keverék laboratóriumi elemzésére. Hatékony kromatográfiás módszer, amely magas nyomást, és nem csupán gravitációt használ fel, hogy a keverék mintáját egy oszlopon keresztül meghúzza. A mintát befecskendezik, majd egy nagy nyomástartó szivattyú segít a minta mozgatásában egy csomagolt oszlop mentén, ahol azt különálló komponensekre választják szét. Ezt az elválasztást detektorral elemezzük, hogy eredményeket kapjunk.
Befecskendezési hely
A HPLC-be történő injektáláshoz a mintát először egy poláris folyékony oldószerben kell feloldani, lehetőleg ismert HPLC spektrummal rendelkező oldószerben, hogy adatai meg lehessen különböztetni a mintáktól. A mintát tartalmazó folyékony oldatot a műszerbe helyezik, és az oszlopba juttatják. Az injekció beadási helyének tényleges elhelyezkedése az eszköz márkájától függ. A legtöbb esetben az injekciós folyamat automatizálódik, de néhány esetben a laboratóriumi dolgozóknak egy kis fecskendőtű segítségével kell beinjektálni a mintát.
Szivattyú alkatrész
A HPLC-egység szivattyúkomponense szükséges, mivel biztosítja azt a nyomást, amely a mintát az oszlopon hajtja. A szivattyú szilárdsága változó, de egy hatalmas nyomás akár 6000 psi, vagy font / négyzet hüvelyk nyomást eredményezhet, amelyet a minta befecskendezése után alkalmaznak. Ez lehetővé teszi, hogy a minta gyorsabban és hatékonyabban haladjon át az oszlopon, mintha csak a gravitációs erő felhasználásával csepegjen át.
Oszlop leírása
A szivattyú által az oszlopon áthaladó minta megnövekedett sebessége más típusú oszlopot is lehetővé tesz, mint az egyszerű folyadékkromatográfiában. Az oszlopban lévő csomagolóanyagnak sokkal kisebb a részecskemérete, amely növeli a felületét, és ezért elősegíti a minta kölcsönhatását az oszloppal. A legtöbb HPLC oszlop polaritáson keresztül működik. A mintát poláris oldószerben oldjuk, és az oszlopot nagyrészt nem poláros szénhidrogénekből álljuk. A mintamolekula poláris részei nagyon gyorsan áthaladnak az oszlopon, mert elsősorban kölcsönhatásba lépnek az oldószerrel, míg a minták nem poláros komponensei elhalasztódnak az oszlopban, és gyenge kölcsönhatásokat képeznek az oszlopkomponensekkel. Ezért a mintakomponensek a legtöbb polaritól a nem polaritásig jönnek ki az oszlopról.
Detektor funkció
Az érzékelők a használt HPLC eszköz típusától is függnek. A legtöbb ugyanakkor ugyanúgy működik. Az ultraibolya fényforrás ragyog az elválasztott mintakomponensekre, amikor azok lejutnak az oszlopról. A legtöbb szerves vegyület bizonyos mennyiségű fényt abszorbeál, tehát amikor az alkalmazott fénysugár áthalad, a detektor képes felvenni, hogy mennyi fényt vesz fel. Az érzékelő az alkatrészek retenciós idejét is rögzíti az oszlopból való kijutási sorrend alapján. Ezt a kimenetet ezután a csúcsterület alapján elemezhetjük a mintakomponensek pontos természetének meghatározása céljából.