Tartalom
A tudósok soros hígításokat (1:10 hígítások sorozatát) használnak a baktériumtenyészetek népsűrűségének kiszámításához. Ha csepp tenyészetet tartalmaz kis számú baktériummal lemezelünk és inkubálunk, elméletileg minden sejt elég messze van a többi sejttől, hogy saját kolóniáját képezzék. (A valóságban néhány kolónia két közeli sejt leszármazottja lehet, de ez híg tenyészeteknél ritka, ezért a kolóniák száma nagyon jó becslés az eredetileg a lemezre átvitt sejtek számáról.) Mivel a populáció sűrűsége ismeretlen, különféle hígításokat kell használni ahhoz, hogy egy lemez megfelelő számú kolóniával rendelkezzen.
Soros hígítások
A hat tesztcsövet (mindegyik 9 ml tápközeget tartalmaz) jelölje meg 1-től 6-ig. Jelölje meg a hat agarlemezt 1-től 6-ig. Használjon pipettával és steril 1 ml (ml) -es pipettával a csövekbe 1 ml baktériumtenyészetet. 1.
Keverjük össze alaposan, és pipettával és 1 ml-es steril tippekkel tegyünk 1 ml-t az 1. csőből a 2. csőbe.
Ismételje meg a 2. lépést a fennmaradó csövekkel, minden alkalommal vigyen át 1 ml-t a legutóbb használt csőből a következő csőbe.
Használjunk pipettát és steril 0,1 ml-es tippeket, hogy 0,1 ml-t az 1. csőből az agarlemezre helyezzünk. Lassítson egy L alakú üvegrudat és használja azt a csepp egyenletes eloszlatására a lemez körül. Inkubáljuk a lemezt 48 órán keresztül a felhasznált baktériumok számára megfelelő hőmérsékleten. A különféle baktériumtípusok optimális növekedési hőmérséklete eltérő. Ha nem találja meg az optimális növekedési hőmérsékletet a referenciaanyag használatával, akkor inkubálja a lemezeket 25 és 37 fokos hőmérsékleten.
Ismételje meg a 4. lépést, minden alkalommal, amikor a folyadékot egy másik kémcsőből átviszi a megfelelő lemezre.
Népességszámítás
Figyeljük meg a hat lemezt, és válasszuk ki a 30 - 200 izolált telepet tartalmazó lemezt.
Szorozzuk meg a tányéron levő telepek számát 10-gyel, hogy kiszámítsuk a tenyészet ml-jében a sejtek számát az alkalmazott hígítócsőből.
Szorozzuk meg a 2. lépésben megadott számot 10-gyel (lemezszám), hogy kiszámítsuk a sejtek számát az eredeti tenyészet ml-jében. A 10 ^ érték (lemezszám) a tenyészet inokulálásához használt tenyészet hígítási tényezője.