Tartalom
- Hogyan működnek a pufferek?
- A puffer követelményei
- Megfelelő puffer kiválasztása
- Hogyan változtassuk meg a puffer pH-ját?
- Példák biológiai pufferekre
A sejtekben és az élő szervezetekben a sejteket körülvevő és azokon belüli folyadékokat állandó pH-értéken tartják. Ebben a rendszerben a pH gyakran döntő jelentőségű a szervezetben zajló biokémiai reakciók szempontjából. A laboratóriumi biológiai folyamatok tanulmányozására a tudósok puffereket használnak a helyes pH-érték fenntartására a kísérlet során. Sok biológiai puffert eredetileg Good és munkatársai írtak le 1966-ban, és ma is használják laboratóriumokban.
Hogyan működnek a pufferek?
A puffer egyszerűen oldat, amely gyenge savat és konjugált bázist tartalmaz. Amikor egy sav hozzáadódik a pufferhez, reagál a konjugált bázissal, gyenge savat eredményezve, és alig befolyásolja az oldat pH-ját.
A puffer követelményei
Számos tulajdonság teszi a biológiai puffert hatékonnyá. Oldékonyságúaknak kell lenniük vízben, de nem oldódnak vagy minimálisan oldódnak a szerves oldószerekben. A puffernek nem szabad átjutnia a sejtmembránon, mivel ez befolyásolhatja a sejt viselkedését. A puffereknek nem mérgezőnek, nem szabad elnyelniük az UV sugárzást, és inerteknek és stabilaknak kell maradniuk a kísérleti folyamat során. A hőmérséklet és az ionos összetétel nem változtathatja meg a pH-t vagy a pufferkapacitást.
Megfelelő puffer kiválasztása
A kiválasztott puffernek a pKa-nak a vizsgált eljáráshoz optimális tartományban kell lennie. Magasabb pKa-tartalmú puffer akkor megfelelő, ha a kísérlet során valószínűleg emelkedik a pH, és fordítva, ha a pH várhatóan csökken. A pufferkoncentrációkat optimalizálni kell, mivel a 25 mM feletti koncentrációk jobb pufferkapacitással rendelkezhetnek, de gátolhatják a celluláris tevékenységeket, például az enzimeket. A módszer azt is diktálja, hogy mely puffert kell használni; például az elektroforézis során az alacsony ionerősségű puffer megfelelő a gélmátrix felmelegedésének megakadályozására.
Hogyan változtassuk meg a puffer pH-ját?
Mivel a pH változhat a hőmérsékleti változásokkal, a tudósoknak meg kell vizsgálniuk a pufferek pH-ját azon a hőmérsékleten, amelyen a kísérletet elvégzik. A trisz puffer, amely különösen érzékeny a pH változására a hőmérséklet függvényében. Az összes pH-mérőt munkahőmérsékleten kell kalibrálni. Az adalékanyagok megváltoztathatják a pH-t is, ezért az ismételt tesztelés szükséges. A pH megváltoztatásához savas, általában sósavat vagy bázist, általában nátrium- vagy kálium-hidroxidot adunk hozzá; ezt lassan kell megtenni a puffer inaktiválásának vagy kémiai változásainak elkerülése érdekében.
Példák biológiai pufferekre
A TE puffer, amely 10 mM Tris · HCl és 1 mM EDTA, megfelelő számos pH-értéknél a nukleinsavak tárolására. Az elektroforézis a fehérjék vagy nukleinsavak vizsgálatának általános módszere; ez a folyamat számos puffert használ, beleértve a trisz-acetát-EDTA, a trisz-glicin és a trisz-borát-EDTA puffereket. Ezek a pufferek megakadályozzák a gél mátrix melegítését, és a vizsgálattól függően adalékanyagokat, például karbamidot és SDS-t tartalmazhatnak.