Tartalom
A grammfestés egy differenciálfestési eljárás, amely megmutatja, hogy melyik baktériumok grampozitív vagy gramnegatív a színe színük alapján. Az aceton-alkohol az egyik reagens, amelyet ebben a folyamatban használnak a szín differenciálódásának biztosítására. A grampozitív baktériumok vastag peptidoglikán réteggel rendelkeznek, és lila színűek, míg a grampozitív mikroorganizmusok peptidoglikán réteggel alig vannak, vagy egyáltalán nem rózsaszínűek.
Elsődleges folt-kristály ibolya
Miután elkészült egy bakteriális minta diája, először kristályibolya festenek a mintát. Ezen a ponton mind a gram-pozitív, mind a gram-negatív baktériumok lila színűek lesznek. A kristályibolya általában a tárgylemezen 30 másodpercre kerül, mielőtt a fölösleges foltot vízzel lemossa. A kristályibolya kissé tapadhat a peptidoglikán rétegekhez, így nem minden elsődleges foltot mossa le a víz.
Pác-Jód
Ezután jódot adunk a mintához egy percig. Pezsgőként szolgál, amely a festékek rögzítéséhez szolgál a festési folyamat során. A jód ezt a funkciót úgy végzi, hogy megköt a kristályibolya felé, és olyan oldhatatlan komplexet hoz létre, amely sokkal jobban tapad a grampozitív baktériumsejtekben található vastag peptidoglikánréteghez, mint pusztán a kristályibolya. A jód hozzáadása után nincs mosási lépés vízzel.
Decolorizer-alkohol
Színtelenítőszerként akár aceton, akár etil-alkohol használható. Az alkohol feloldja a Gram-negatív baktériumok külső sejtmembránjában található lipideket, lehetővé téve a kristályibolya-jód komplex kiszivárgását a vékonyabb peptidoglikán rétegből. Az alkoholt 10-20 másodpercig adjuk hozzá; addig öntjük a lemezen, amíg az összes jód el nem mossa és a kifolyás színtelen. A grammfestési folyamat ezen a pontján a gram-negatív baktériumok színtelenek, míg a grampozitív baktériumok továbbra is megtartják a kristályibolya-t. Miután elkészült, a lemezt vízzel kell öblíteni, hogy megszüntesse az elszíneződés hatását.
Counterstain-Szafranin
Ezután hozzáadunk szafranint, hogy növeljük a színtelen Gram-negatív baktériumok láthatóságát és kontrasztját. A folt miatt ezek a baktériumok rózsaszínűek lesznek a mikroszkóp alatt. Mivel a foltot hozzáadják az egész mintához, ez szintén megfesti a gram-pozitív baktériumokat, ám a kristályibolya sötétebb része elfedi a világosabb safranin rózsaszín színét. Miután a tárgylemezt körülbelül egy percig elárasztottuk szafraninnal, vizet használunk a felesleges foltok lemosására, amelyek nem tapadtak a baktériumsejtekhez.