Tartalom
A baktériumokat Petri-csészékben, bakteriális agar néven ismert szilárd táptalajon tenyésztjük, ahol emelt, kör alakú kolóniák alakulnak ki. Az egyes baktériumsejtektől eltérően, a kolónia olyan baktériumcsoport, amely elég nagy ahhoz, hogy szabad szemmel látható legyen. A baktériumok növekedését úgy lehet megmérni, hogy hány kolónia van jelen; azonban a kvantitatívabb módszerek között szerepel egy számláló kamra, vagy gyakrabban az életképes lemezszám. Ez utóbbit használják leggyakrabban, mivel kvalitatív információkat is szolgáltat, például a változó növekedési feltételek hatásáról. Mivel a Petri-csészében baktériumok milliárdjai lehetnek, a méréshez először meg kell hígítani a mintát, hogy meg lehessen számolni a kolóniák számát.
Egy kémcsőben adjunk hozzá 10 mikroliter kiindulási baktériumtenyészetet 90 mikroliter hígítóközeghez. Zárja le szorosan a cső fedelét és óvatosan keverje fel, hogy homogén keveréket kapjon. Most a minta az eredeti koncentráció egytizedének felel meg.
Helyezzünk 10 mikrolitert ebből az új mintából egy új, 90 mikroliter hígítóközeget tartalmazó kémcsőbe, és keverjük össze ismét. Az ismét az eredmény lesz, hogy a mintát tovább hígítják - ez most az eredeti koncentráció századának felel meg. Ismételje meg ezt többször, mindaddig, amíg az eredeti minta hígításra kerül 10 ° C között4 és 10.10 alkalommal. Győződjön meg arról, hogy minden csövet a megfelelő hígítású, például 10-es jelöléssel kell ellátni-1, 10-2 stb.
Az utolsó hígítás 10 mikroliterét adagoljuk az agarlemezre. A szórási él segítségével ossza el a baktériumoldatot az agarlemez teljes felületén. Ismételje meg ezt még két lemezen. Szintén általános, hogy ezeket a lépéseket más hígítási szintekkel hajtjuk végre összehasonlítás céljából. Ne felejtse el feltüntetni a tányérok alját. Helyezze vissza az egyes lemezek fedeleit és hagyja az agarlemezeket néhány percig száradni egy laboratóriumi padon, láng alatt, vagy inkubátorban. Helyezze a lemezeket az inkubátorba, amelyet a baktérium törzsének megfelelő hőmérsékletre kell állítani. Hagyjuk 12–16 órán át növekedni.
A telepeknek 16 óra elteltével láthatónak kell lenniük; egyes genetikai módosítások azonban hosszabb időt igényelhetnek (például a színfejlődés). Amikor a kolóniák megfigyelhetők, vegye ki a lemezeket, és keresse meg azokat, amelyekben 30-300 telepek vannak. Állandó jelölővel helyezzen egy pontot a Petri-csészék aljára - az agar oldalára, és ne a fedőre -, bárhol a kolónia látható az agaron. Számoljuk meg az egyes pontokat. Ismételje meg az egyes ételeket.
A kísérlet kiindulási tenyészetében a baktériumok mennyiségének méréséhez a hígítást két helyen kell megfordítani a számítások során. Először, amikor egy mikrolitrt vett a kémcsőből a petri-csészébe, akkor a hígított minta egytizedét vették, tehát mindent tízszer meg kell szorozni annak megfordításához. Ezenkívül, ha például a kémcsőben a hígítási tényező 10 volt-7 , akkor a kolóniák számát tízszer kell megszorozni7 a hígítási hatás megfordítása érdekében. Egyszerűen távolítsa el a negatív jelet az exponenstől a számításokban. Használja a következő képletet:
× 10 × = a kolóniaképző egységek száma (CFU) a kiindulási tenyészet milliliterjében. Ez a baktériumok növekedése a Petri-csészékben.