Nem volt olyan régen, hogy a géntechnika a tudományos fantastika dolga - az egyik szervezet egy másik szervezet tulajdonságaival növekszik. Az 1970-es évek óta azonban a genetikai manipulációs technikák olyan fejlõdést mutattak, hogy az idegen DNS-nek a szervezetbe való szétválasztása szinte rutin. Például a kártevőrezisztencia géneit szét lehet osztani kukoricába, az emberi inzulin előállítására szolgáló géneket baktériumokba lehet helyezni, az emberi rákot utánozó géneket pedig laboratóriumi egerekbe lehet helyezni. Az eljárás részletei túlságosan bonyolultak ahhoz, hogy egy rövid cikkben leírhassák, minden lépésnél sok lehetőség van, de a lépések logikus sorrendjének fogalmi vázlata meglehetősen egyértelmű.
Inkubáljuk a plazmid DNS-t és a kérdéses DNS-t egy restrikciós enzimmel. A restrikciós enzim kimutatja a DNS-bázisok egy specifikus szekvenciáját, és elválasztja a DNS-t ezen a ponton. A restrikciós enzimek bizonyos baktériumok vírus elleni védekező mechanizmusából származnak. Olyan molekulák, amelyek elvágják a DNS-t, ha egy adott bázismintát észlelnek.
Inkubáljuk a levágott plazmidot és a genomi DNS-fragmentumokat DNS-ligázzal. A legtöbb restrikciós enzim esetében a kör alakú plazmidnak és a genomi DNS-fragmenseknek komplementer "ragadós végei" lesznek, amelyek egymáshoz ragadnak. A DNS-ligáz ezután befejezi a darabok összeragasztását. Az eredmény egy csomó kör alakú plazmid, amely a genomi DNS egy részét tartalmazza.
Helyezze a plazmidokat a baktériumokba, és tegye a baktériumokat a módosított DNS-sel impregnált szervezetek kolóniáinak tenyésztésére. Ha plazmidjában van olyan antibiotikum-rezisztens gén, amelynek hiányzik a gazda baktérium, akkor automatikusan átvizsgálhatja a sikeresen módosított baktériumokat azáltal, hogy baktériumokat az antibiotikumokkal infuzált táptalajon tenyészti. Számos módszer létezik a plazmidok baktériumokba való beillesztésére, például mikrotű segítségével, elektromos mező alkalmazásával kis lyukakat nyitva a baktériumok membránjában, vagy a baktériumokat és a plazmidokat ugyanabba az oldatba helyezve, és hagyva, hogy a baktériumok abszorbeálják őket. természetesen.
Minta sejtek a módosított baktériumok különböző kolóniáiból. Mossuk a mintába vett sejteket mosószer-oldattal a baktériummembránok lebontásához és a DNS extrahálásához, majd melegítsük vagy nátrium-hidroxidnak tesszük ki a szálak elválasztására. Ez kiiktatja a DNS alapszekvenciáját az elemzéshez.
Inkubáljuk a DNS-t egy fluoreszcens próbával. Ragyogjon ultraibolya fényre az inkubált DNS-en, és figyelje meg, hogy fluoreszcencia-e. A próba egy rövid DNS-szekvenciából áll, amely megegyezik a behelyezett genomiális DNS-sel. Ahol a szonda illeszkedik a keresett DNS-hez, akkor világít, ha világít.
Izolálja a baktériumokat a beiktatni kívánt gént tartalmazó kolóniákból. Másolja a DNS-ét azáltal, hogy hagyja, hogy a baktériumtelepek növekedjenek, vagy extrahálja a DNS-t, ahogy korábban, és másolja be egy polimeráz láncreakciós gépbe.