Tartalom
- Soros hígítások
- Lemezek előkészítése a titer kiszámításához
- A vírus titerének számlálása és kiszámítása
- figyelmeztetések
A vírus titerének kiszámítása bonyolult módszer annak megállapítására, hogy egy tudós számol egy adott mintában a vírusok számát. A vírustiter kiszámításához a tudósok különböző koncentrációjú vírus oldatokkal megfertőzik a növekvő baktériumok lemezeit, és kiszámolják a vírusok számát az eredeti oldatban a vírusfertőzés miatt elpusztult baktériumok megszámolásával.
Soros hígítások
Helyezze fel a kesztyűt, töltsön be 10 tenyésztőcsövet 9 ml tápközeggel, és címkézze fel őket: „10 ^ -1”, „10 ^ -2”, „10 ^ -3” és így tovább, amíg „10 ^ -10.” Ezek a csövek a fág titerének kiszámításához használt vírusos sorozathígításokhoz lesz felhasználva. Mivel a vírusok hihetetlenül magas koncentrációkra nőhetnek, meg kell hígítani azokat a hatékony számolás érdekében. Minden cső a vírus tízszeres hígítását képviseli.
Vegyünk 1 ml vírustenyészetet, amelyben meg szeretné számítani a fág titerét, és vigyük át pipettával a „10 ^ -1” elnevezésű csőbe. Alaposan keverje meg a csövet. Ez az első tízszeres hígítás.
Vegyen ki 1 ml kevert tenyészetet a „10 ^ -1” feliratú csőből és helyezze át új pipettával a következő, „10 ^ -2” feliratú csőbe.
Folytassa ezt a mintát egy soros hígítási sorozat létrehozásához. A végén 9 9 ml-es cső és 10 ml-es 1 cső lesz a végén. A csöveiben lévő vírusterhelést bárhol hígíthatják, tízszeres (az első cső) vagy 100-szor (a második cső) és tíz milliárdszor (az utolsó cső) között.
Lemezek előkészítése a titer kiszámításához
Vegyen 10 csövet tripton lágy agart és 10 Petri lemezt, és címkézze meg őket, hogy megfeleljenek a soros hígító csöveknek.
Lazítsa meg a kupakokat, hogy ne kerüljenek ki a melegben, majd helyezze az agarcsöveket forrásban lévő vízpoharatba. Ez megolvasztja az agar oldatot, hogy öntsék azt Petri-lemezekre.
Helyezze át a csöveit legalább 45 Celsius fokos forróvizes fürdőbe. Ez biztosítja, hogy az agar nem megszilárdul a csövekben, mielőtt lehetősége lenne önteni Petri-csészébe.
Adjunk hozzá két csepp baktériumtenyészetet agarjába, és óvatosan keverjük össze. Ezek azok a baktériumok, amelyek elpusztulnak, lehetővé téve számolni a vírusrészecskék számát egy adott oldatban.
Adjunk hozzá minden egyes soros hígításból 1 ml-t a megfelelő agarcsőhöz, miközben a csövek még mindig forróvizes fürdőben vannak. Például, a 10 ^ -1 sorozatú hígítás 1 ml-ének bele kell mennie az „10 ^ -1” feliratú agarcsőbe.
Keverjük össze az egyes csöveket, majd öntsük mindegyik csövet a Petri lemezre a megfelelő címkével. Ez egy vékony agarréteget hoz létre, amelyet az egyes lemezeken baktériumokkal és vírusokkal oltanak be. A lemezeket hagyjuk egy éjszakán át inkubátorban növekedni.
A vírus titerének számlálása és kiszámítása
Vegye ki a lemezeit az inkubátorból és vizsgálja meg őket. A lemez egész területén zavaros területeket kell látnia, ahol baktériumok nőnek, kivéve a kis átlátszó foltokat, amelyeket plakkoknak hívnak. Ezek a plakkok elhalt baktériumok foltok, és minden plakk egy vírust képvisel.
Keressen egy olyan lemezt, amelyen 30 és 300 plakk van, és számolja ki a lemezen a pontos lemezeket.
Vegye le a táblán a táblák számát és szorozza 10-del. Ha 157 plaket számol, akkor 1570 lesz.
Szorozzuk meg az előző lépésben kapott számot a hígítócsőben lévő szám fordítottjával. Például, ha a kiválasztott lemez a 10 ^ -5 lemez volt, akkor meg kell szorozni az 1570-et 10 ^ 5-rel, hogy 157000000-ot kapjon. Ez a végső szám az Ön fágtiterje, és az eredeti tenyészet ml-jén megjelenő vírusszámot képviseli.