Tartalom
Mérje meg RNS-mintáját az ultraibolya fény (UV) abszorbanciájának mérésével. A nano-drop spektrofotométer csak egy vagy két mikroliter mintát fog felhasználni, amelyeket visszanyerhet. Más spektrofotométerek sokkal nagyobb mintát igényelnek. A nukleotidok extinkciós együtthatója 260 nm UV-hullámhosszon, 1 cm-es fénypályán 20. Ez az extinkciós együttható alapján 40 ug / ml RNS abszorbanciája azonos körülmények között egy. Ezen információk felhasználásával kiszámíthatja az RNS-minta koncentrációját.
Szükség esetén készítsen hígítást a mintáról. A mikrohullámú sütő standard hígítása 1:40. Ezt a hígítást úgy végezzük, hogy 2 ul RNS mintát adunk hozzá 78 ul steril vízhez.
Kövesse az adott spektrofotométer protokolljait a gép kalibrálásához egy vakpróba segítségével, majd meghatározza a minta optikai sűrűségét 260 nm UV-hullámhosszon.
Szorozzuk meg a minta abszorbanciáját a hígítási tényezővel 40 μg RNS / ml-vel. Az egyenlet a következő: „RNS-koncentráció (µg / ml) = (OD260) x (hígítási tényező) x (40 µg RNS / ml) / (1 OD260 egység)” (Hofstra.edu) Például: Ha a mintát 1:40 és az abszorbanciaértéke 0,08 volt, akkor megszorozzuk 0,08 x 40 x 40 = 128 μg / ml = 0,13 μg / μL
Mutassa ki a minta tisztaságát egy újabb abszorbancia leolvasással, 280 nm UV-hullámhosszon. Az OD 260 / OD 280 arány jelzi, hogy a mintája szennyezett-e proteinnel vagy fenollal - és milyen szinten -. Az 1,8 és 2,0 közötti eredmény minőségi RNS-t jelez.