Hogyan lehet kiszámítani a sejtek koncentrációját?

Posted on
Szerző: John Stephens
A Teremtés Dátuma: 25 Január 2021
Frissítés Dátuma: 9 Lehet 2024
Anonim
Hogyan lehet kiszámítani a sejtek koncentrációját? - Tudomány
Hogyan lehet kiszámítani a sejtek koncentrációját? - Tudomány

A tudósoknak és technikusoknak gyakran ki kell számolniuk a szuszpenzió sejtkoncentrációját. Például, amikor a beteg vérét az orvosi rendelőben veszi fel, a laboratórium bizonyos módszerekkel felkutathatja a fehérvérsejtek mennyiségét egy adott vérmennyiségben. Ez sok információt ad az orvosnak a betegének egészségi állapotáról, különös tekintettel immunrendszerére és arra, hogy fertőzés vagy más betegség ellen küzd-e. Az ilyen vizsgálatok számos más vér sejtjét, valamint gerincfolyadékát és más testfolyadékokat is felkutathatják, például a spermák számát a spermában termékenységi célokra. A tudósok számos célra kiszámítják a baktériumok, élesztők és más mikroorganizmusok sejtkoncentrációját is, az ökológiai kutatástól az ipari technológiáig. Az egyik leggyakoribb technikát sok főiskolai biológiaórában is tanítják, és egy számlálókamrának nevezett eszközt használnak.


    Mielőtt a sejtszuszpenzió bejuthat a számlálókamrába, hígításra lehet szüksége, mivel ezreket vagy milliódokat tartalmazhat. Ebben az esetben a cellákat nem lehet ésszerűen megszámolni. A minta hígításához steril pipettával tegyünk tíz mikroliter sejtoldatot egy 90 mikroliter hígítót tartalmazó kémcsőbe. A hígítószer típusa a sejt típusától függ. Keverje össze jól. Ez az oldat most tízszer hígítva, mint a kezdeti minta, tehát hígítási tényezője 10-1. Címkézze meg. Ismételje meg ezt többször, steril pipettával minden alkalommal, amíg az oldat eléggé meg nem hígul. Ha második alkalommal hígította, akkor a második kémcső 100-szor hígult, mint a kezdeti oldat, tehát a hígítási tényező 10-2 stb.


    Előfordulhat, hogy több hígítást kell kipróbálnia a számlálókamra megfelelő hígítási tényezőjének meghatározásához. A számláló kamra alapvetően egy nagyon kicsi, tiszta, téglalap alakú doboz, pontos mélységgel és a tetejére írt pontos ráccsal. Hemocitométernek, vagy néha hemacytométernek is nevezik. A cél az, hogy a szuszpenzió elegendően híg legyen, hogy amikor a számláló kamrába nézzük, sejtek nem fedik át egymást, és egyenletes módon eloszlanak a rácsban. Pipettázzuk a sejteket tartalmazó hígított szuszpenziót a számlálókamrában lévő kútba, ahol kapilláris hatással az a rácskamrába kerül. Helyezze a számláló kamrát a mikroszkóp színpadára és nézze meg alacsony teljesítmény mellett.


    A rács négyzeteket tartalmaz, amelyek még kisebb négyzetekből készülnek. Válasszon körülbelül négy vagy öt négyzetet, vagy akár sokat is meg kell számolnia legalább 100 cellával, a választott mintázat szerint, például a négy sarok és a középső négyzet. Ha a cellák nagyok, ezek lehetnek a nagy négyzetek, de ha a cellák kicsik, akkor inkább a kisebb négyzeteket választhatja.

    Az egyes rács négyzetek fajlagos térfogata a kamra gyártójától függően változhat, de gyakran a kamra mélysége 0,1 mm, a nagy négyzetek területe 1 négyzet milliméter, a kisebb négyzetek területe pedig 0,04 négyzet milliméter. A nagyobb négyzetek térfogata tehát 0,1 köbméter milliméter. Tegyük fel, hogy ebben a példában összesen 103 sejt számolódik öt négyzetben, és a kezdeti mintát addig hígította, amíg a hígítási tényező 10-2.

    Ha mindegyik rács négyzet térfogata 0,1 köbméter milliméter, és öt megszámlálásra került, akkor a megszámlált kamra teljes térfogata 0,5 köbméter volt, és 103 cella volt. Megduplázva, hogy 1 köbmétermilliárd legyen, 206 sejt lesz. Egy köbcentiméter egyenlő 1 milliliterrel, ami hasznos mérés folyadékok számára. 1000 köb milliméter van egy köbcentiméterben. Ezért ha egy köbcentiméter vagy milliliter szuszpenzió lenne, akkor 206 000 (206 x 1000) sejtet számolt volna meg. Így néz ki, mint egyenlet:

    A rács térfogata × a számolt négyzetek száma = a számolt szuszpenzió teljes térfogata

    Sejtek száma ÷ a megszámlált szuszpenzió térfogata = sejtszám per milliméterben, kockában

    Sejtszám milliméterre vetítve × 1000 = sejtszám mililiterben

    A hígítást elvégeznie kell annak érdekében, hogy a kezdeti oldat mikroszkóp alatt számolható legyen. Ebben a példában a hígítási tényező 10-2. Az oldat kezdeti koncentrációjának kiszámításához:

    Sejtszám mililiter / hígítási tényező = sejtkoncentráció

    Ebben a példában a sejtszám milliliterben 206 000, és ezt el kell osztani 10-del-2 (0.01) szerint a kiindulási mintában 20 600 000 sejt / ml sejtkoncentrációt kapunk.